1. 在大肠杆菌中表达可用作结构剖析的CYP-X卵白
2. 纯度可凌驾95%的IgM生产
3. 用杆状病毒熏染的昆虫细胞表达系统来生产激酶-Y
4. 接纳差别的抗体筛选平台获得种型特异性抗体
5. 从九游会生物自主构建的全人自然抗体噬菌体库中筛选抗体药物
6. 用亲和力成熟获得K
7. GPCR Production

规范剖析：在大肠杆菌中表达可用作结构剖析的CYP-X卵白

配景

客户要求从基因序列最先生产CYP-X卵白并用纯化后的卵白长晶体来做结构剖析
。

挑战

解决计划/效果

• 九游会生物实验了差别的大肠杆菌菌株以及多种表达载体组合来优化该卵白的表达，同时还在作育基里加入了微量元向来提高产量
  。
• 项目组在纯化历程中使用高盐裂解缓冲液，并使用了弱阳离子柱来优化纯化工艺
  。
• 通过这些起劲，项目组乐成使该卵白的表达从小于0.5mg/L提高到了15mg/L，并且用表达出的卵白获得了高质量的衍射晶体，乐成运用在了却构剖析中
  。

返回页首

点击此链接看大图

---

规范剖析：纯度可凌驾95%的IgM生产

配景

客户要求生产95%以上纯度的IgM （通过SDS-PAGE和HPLC检测）
。

挑战

解决计划/效果

• 九游会生物的项目组在查阅了大宗的文献后决议接纳一种新要领来举行对撒播质
  。
• 同时团结在大分子卵白生产上积累的富厚履历，项目组提出了一种新的三步柱纯化计划
  。
• 最终乐成实现了在短短六周内就交付了200mg完整表征的纯度97%的IgM
  。

返回页首

点击此链接看大图

---

规范剖析：用杆状病毒熏染的昆虫细胞表达系统来生产激酶-Y

配景

客户要求生产高纯度的激酶-Y
。

挑战

• 该卵白在大肠杆菌里是作为容纳体表达的
  。
• 客户曾在他们自己的昆虫细胞里实验过表达，效果产量很是低
  。
• 由于旧有的纯化要领需要多个柱子，纯化时间的过长也导致了纯度和卵白降解
  。

解决计划/效果

• 九游会生物项目组首先把杆状病毒的滴度乐成提高到了108 pfu/ml
  。
• 并且通过差别的MOI和时间点的实验进一步优化了表达量
  。
• 继而通太过子筛和亲和柱优化了纯化工艺
  。
• 最终项目组乐成从1.6L的作育系统中交付了25mg纯度高于95%的激酶-K
  。

返回页首

点击此链接看大图

规范剖析：接纳差别的抗体筛选平台获得种型特异性抗体

配景

• 靶标卵白有两个亚型，两个亚型之间区别很小
  。
• 我们已经找到一些针对亚型1的功效抗体，并且从杂交瘤手艺中获得了许多同时团结亚型1和亚型2的功效抗体
  。

挑战

经由多次免疫，始终没有获得特异性针对亚型2的功效抗体
。

解决计划/效果

通过对我们自主构建的人自然噬菌体库举行筛选，我们可以只用一次战争就获得亚型2特异性的功效抗体，总结见右图
。

返回页首

点击此链接看大图

---

规范剖析：从九游会生物自主构建的全人自然抗体噬菌体库中筛选抗体药物

配景

用九游会生物自己建设的全人自然抗体库中获得特异性识别抗原1的两个剪接异变体1a和1b的抗体
。

挑战

• 靶标抗原有两个剪接体（1a和1b），之间区别大于20个氨基酸
  。
• 杂交瘤手艺不可获得选择性识别1b抗原的抗体
  。

解决计划/效果

用抗原1b作为筛选目的，同时加入抗原1a作为竞争剂，从人自然抗体噬菌体库中筛选抗体，用单克隆抗体噬菌体ELISA检测第二轮和第三轮的产品， 寻找特异性团结的抗体噬菌体
。筛选中我们发明，第三轮的产品中抗原1b特异性的抗体获得富集，而抗原1a和1b的交织团结抗体响应镌汰
。序列剖析第三轮的阳性克隆，获得6个差别序列的抗体株，其中2个和细胞外貌表达的抗原1b有很是强的团结 （数据未显示）
。

返回页首

点击此链接看大图

---

规范剖析： 用亲和力成熟获得Kd值在皮摩尔级别的抗体

配景

要求对客户的鼠单克隆抗体举行亲和力成熟并人源化
。

挑战

母本抗体的亲和力约1nM，需要提高亲和力到几十pM，以抵达与比照抗体亲和力靠近或者更高
。

解决计划/效果

• 我们使用两个要领提高抗体亲和力:

1.小气突变（Parsimonious mutagenesis）重链的CDR3区
2.对轻重链举行随机突变

• 小气突变（Parsimonious mutagenesis） 将亲和力提高10倍
• 随后举行随机突变，获得5个亲和力提高的克隆
• 最后选择了一个克隆，具有皮摩尔级别的亲和力，优于比照抗体
  。

返回页首

点击此链接看大图

---

Case Study: GPCR Production

Aim

Production of a high quality GPCR protein in insect cells
Reconstitution of GPCR into nanodiscs

Key Challenges

Expression level of GPCR was very low <0.2 mg/L
The protein was unstable and its conformation was very flexible
It was hard to reconstitute GPCR into nanodiscs

Results

• Expression constructs were optimized
• ~1.5 mg/L was achieved after optimizing expression and purification protocol
• Purity >90%
• GPCR’s conformation was stabilized by suitable ligand
• GPCR-nanodiscs was successfully assembled

返回页首

点击此链接看大图